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如何正确配制和准备流动相?

发布日期:2012-11-24      浏览次数:10504

1、溶剂的纯化

   在液相色谱仪分析中,正相色谱以已烷作为流动相的主体,二氯甲烷、氯仿、乙醚作为改性剂;反相色谱以水作为主体,以甲醇、乙睛、四氢吠喃作为改性剂。HPLC分析均应使用HPLC级纯度的溶剂,AR级的溶剂可能会由于杂质的存在而出现鬼峰。正相色谱分析中使用的己烷、二氯甲烷、氯仿、乙醚中经常含有微量的水分,这会改变液固色谱柱的分离性能,使用前应用球形分子筛柱脱去水分。反相色谱分析中使用的甲醇、乙睛、四氢吠喃,不必脱除微量水,但甲醇、乙睛等使用前经硅胶柱净化,去除具有紫外吸收的杂质。要保证配制流动相用水的纯度足够高。由于去离子水通常含有一些有机物,所以不适合用于HPLc分析用,使用超纯水(电阻率18Mfl.cm)。如果条件有限,可将去离子水再次蒸馏,现用现蒸,保持新鲜,还能脱去CO2,使用效果也不错。

2、缓冲溶液

   有些分析需要用到缓冲盐的流动相,配制时盐试剂要用AR级以上、没有污染、过期;现用现配,不要储存时间过长,避免pH值发生变化和成分分解,影响色谱分离的效果。缓冲盐的流动相能在实验室自己配制,商品化的流动相可能会添加有硫代硫酸钠稳定剂,会影响缓冲液的光学和色谱性能。

3、过滤

   无论是有机水溶液还是缓冲盐溶液的流动相,配好后都要通过0.45卜m滤膜过滤后再上机使用,这样能够有效防止由于微粒的存在使流路管道堵塞。过滤后应把溶剂放在密闭容器中,以防止被重新污染。过滤后的溶液既可用于色谱分析,也可用于清洗诸如泵头、柱塞杆、单向阀和密封圈等仪器部件,保持输液泵的性能良好。

4、脱气

   所有的流动相在进人HPLC系统之前都应该首先脱气(即使仪器上有在线脱气),因为没有脱气的流动相进人到高压系统后存在的气泡会导致系统的流速和压力不稳定,出现鬼峰等间题。从溶液中排除气泡的方法主要有:真空脱气、氦气脱气和超声波脱气实际工作中真空抽滤的方法很有效,它既能脱气又能过滤,但必须在上机前完成。在线连续脱气可以防止气体随温度的变化重新溶解在溶剂中。


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