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液相色谱仪的发展并不局限

发布日期:2015-02-06      浏览次数:1206
   液相色谱仪的发展并不局限
  液相色谱仪检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸收,荧光发射和电化学三种。 液相色谱仪紫外检测器应用于对紫外光有吸收的药物,大多数药物分子对紫外光有吸收,故能较普遍采用,检测限有0.1μg左右。紫外检测器有固定波长型、可变波长型及扫描器,既能使流动相停流作组分的定性定量检测,又能提高测定灵敏度,重现性较好。荧光发射检测器对能产生荧光的药物才能使用。80年代应用激光替代氙灯光源,光强度增加了3~4倍,对某些药物的检测限可达pg级。电化学检测器是由一个碳糊或破碳做成的蒲层电解池。常用于检测儿茶酚胺类及有酚类基团的各种药物和代谢物。流出组分进入2μl的薄层电解池,在一暄电压下电解产生电流,放大后检测,检测限pg级。
  液相色谱仪的化学键合固定相是利用化学反应将有机分子键合到载体表面上,形成均一、牢固的单分子液膜。特点如下:
  1、固定相不易流失,柱的稳定性和寿命较高。
  2、能耐受各种溶剂,可用于梯度洗脱。
  3、表面较为均一,没有液坑,传质快,柱效高。
  4、能键合不同基团以改变其选择性。如键合氰基和氨基等极性基团用于正相色谱,键合C2、C4、C6、C8、C18、C22烷基和苯基等非极性基团用于反相色谱,键合离子交换基团用于离子色谱等。
  因此,化学键合固定相是液相色谱仪较为理想的固定相。
  液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
  液相色谱仪流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中,经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱,zui后自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法(isocratic dlution),即自洗脱开始到结束,溶剂的配比恒定。另一类为梯度洗脱法(gradicnt clution),即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比,从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离,而整个液相色谱仪色谱过程缩短。必须注意,梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相液相色谱法中。
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