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色谱柱的死体积是什么,怎么计算

发布日期:2021-04-08      浏览次数:7912
   色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等,柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效。

 


   死体积狭义上指的是色谱柱中未被固定相占据的空隙体积,即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置(进样口)到检测位置(检测器流通池)这一段的体积(PS:除去色谱柱中填料体积),一旦色谱柱连接,这段体积是不变的(死的)。

   对于HPLC来说,该如何计算死体积呢。 
   死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙(被流动相占据,Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程,其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展,这3部分体积应尽量减小。

   死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通过色谱柱的时间。

   测量系统死体积通常需要通过实验进行测量,常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液(方法中会有规定,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流动相得到的溶液,也有直接用100%色谱纯甲醇进样的情形)时,就会得到一个色谱峰,由此峰可以测得死时间(t0),这就是t0的实测结果。

   然后通过计算得到系统死体积:死体积(V0) = 死时间t0×流动相的流速F。

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