液相色谱仪如何测定色氨酸含量

1、实验仪器与试剂

   色氨酸样品，甲醇， 液相色谱仪梯度系统，紫外检测器，手动进样阀，色谱工作站，0.03%KH2PO4溶液

2、HPLC色谱分析条件

   流动相为0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），线性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱温 35℃，检测波长276nm。
流动相 时间（t/min）
 5 10 15 20
A（%） 80 90 80 70
B（%） 20 10 20 30

3、标准溶液的配制

   精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。

4、标准直线的制作

   精密称取色氨酸标准样品适量 ,分别稀释制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。

5、发酵液中样品中色氨酸含量的测定
取发酵液，稀释配制成约 500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。



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